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以下是關(guān)于小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合指南：
BS-2016 小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒
一、試劑盒組成?
預(yù)包被酶標(biāo)板?：96孔或48孔規(guī)格，含抗小鼠CXCR3單抗
標(biāo)準(zhǔn)品?：通常為80ng/瓶或240ng/L濃度，提供2-5瓶
檢測試劑?：
酶標(biāo)抗體工作液(HRP標(biāo)記)
顯色液(TMB A/B液)
終止液(硫酸溶液)
輔助溶液?：
10×標(biāo)本稀釋液、20×濃縮洗滌液
封板膜、密封袋等耗材
二、樣本處理?
樣本類型?：血清、血漿、細(xì)胞上清液或組織勻漿
處理方法?：
血清/血漿?：1000-3000×g離心10-30分鐘，去除顆粒或纖維蛋白
細(xì)胞上清?：離心去除細(xì)胞碎片
組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清
保存條件?：-20℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融
三、實驗步驟?(雙抗體夾心法)
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液配制梯度濃度(如0-400 ng/L)
加樣?：
每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育1-2小時
洗滌?：甩干孔內(nèi)液體，加滿洗滌液靜置30秒，重復(fù)3-5次
加酶標(biāo)抗體?：每孔加入100μL HRP標(biāo)記抗體，37℃孵育30-60分鐘
顯色?：加入TMB底物避光反應(yīng)15-30分鐘
終止與檢測?：
加終止液(50μL/孔)后立即測定450nm OD值
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本濃度
四、注意事項?
溫度控制?：
試劑使用前需室溫平衡20分鐘，避免低溫影響靈敏度
顯色反應(yīng)需嚴(yán)格避光
操作規(guī)范?：
避免孔間交叉污染，使用獨立槍頭
邊緣孔易出現(xiàn)“邊緣效應(yīng)"，建議棄用外周孔
數(shù)據(jù)有效性?：
標(biāo)準(zhǔn)曲線R2應(yīng)≥0.99，復(fù)孔CV值<15%
五、常見問題?
靈敏度下降?：可能因試劑未恢復(fù)至室溫或超過有效期
背景過高?：洗滌不或樣本溶血導(dǎo)致
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